2.3. ESTRATEGIA CON BIOENSAYOS DIRECTOS

Figura 1.1. - Este diagrama de flujo muestra (a) los principios generales la estrategia del análisis por bioensayo directo y (b) los procedimientos de extracción y fraccionamiento usados en la investigación de los mejillones tóxicos (almejas tóxicas, según la traducción literal del inglés al castellano).

La estrategia con biosensayos directos fue la siguiente:

- Se obtuvieron extractos en paralelo de mejillones tóxicos y de control y a través de una serie de etapas de separación se van diferenciando los componentes y las fases.

- Se utiliza una parte de cada fracción separada para bioensayos en ratones y determinar de esta manera en que proporción se encuentra la sustancia o las sustancias tóxicas.

- Los círculos en negro indican positivo en la prueba.

- Todas las fracciones, tanto de mejillones tóxicos como de control, son analizadas por diferentes técnicas analíticas, cromatográficas y espectroscópicas.

- Se pretende comparar las “huellas” cromatográficas y espectroscópicas de las fracciones en paralelo con el fin de hallar donde se encuentra la o las toxinas y en que fracción se puede estudiar su estructura para llegar a conocer su naturaleza.

- Para evitar fluctuaciones debido a la falta de homogeneización de la muestra, todas las experiencias se realizan utilizando abundante cantidad de muestra previamente homogeneizada tanto de tejido de mejillones tóxicos como mejillones de control.

- Es fundamental el conocer la dosis de control para los bioensayos con ratones, con el fin de saber en todo momento en que fracción o fracciones se encuentran los compuestos tóxicos. Como los síntomas que presentaban los ratones en el bioensayo eran distintos a los observados en la marea roja se estudió en primer lugar la curva-respuesta para la dosis letal.

Figura 1.2.- Curva dosis-respuesta que relaciona el tiempo de muerte de un
ratón con la masa de tejido de almeja equivalente a la dosis de inyección

En la figura 2 se muestra dicha curva, donde se representa la cantidad equivalente de tejido dado a loa ratones (en forma de inyección del extracto) y el tiempo de muerte. Se toma como dosis para el bioensayo 0,6 g de tejido de almeja (cantidad equivalente).